化學發光免疫分析中常用化學發光劑介紹

化學發光免疫測定（CLIA），是用化學發光劑直接標記抗原或抗體的一類免疫測定方法。吖啶酯是較為理想的發光底物，在堿性環境中即可被過氧化氫氧化而發光。它是目前發展和推廣應用最快的免疫分析方法，也是目前最先進的標記免疫測定技術，靈敏度和精確度比酶免法、熒光法高幾個數量級，可以完全替代放射免疫分析、徹底淘汰酶聯免疫分析。主要具有靈敏度高、特異性強、試劑價格低廉、試劑穩定且有效期（6-18個月）、方法穩定快速、檢測范圍寬、操作簡單自動化程度高等優點。

用作標記的化學發光劑應符合條件：

1、能參與化學發光反應。

2、與抗原或抗體偶聯后能形成穩定的結合物試劑。

3、偶聯后仍保留高的量子效應和反應動力。

4、應不改變或極少改變被標記物的理化特性，特別是免疫活性。

魯米諾類和吖啶酯類發光劑等均是常用的標記發光劑�！�

化學發光免疫分析中所使用的標志物分類　

（一）直接化學發光劑 直接用化學發光劑標記抗原或抗體。

吖啶酯是目前常用的直接標記發光劑。

1、吖啶酯　在堿性條件下被H₂O₂氧化時，發出波長為470nm的光，具有很高的發光效率，其激發態產物N-甲基吖啶酮是該發光反應體系的發光體。吖啶酯類發光劑可直接用于標記半抗原和蛋白質等。用于標記抗體時，結合穩定，結合后并不減少光量子的產生，可獲得高的比活性，有利于雙位點化學發光免疫分析的建立。

 2、三聯吡啶釕　三聯吡啶釕是電化學發光劑，它和電子供體三丙胺（TPA）在陽電極表面可同時失去一個電子而發生氧化反應�！　�

（二）酶促反應發光劑 利用標記酶（辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶）的催化作用，使發光劑（底物）發光。

辣根過氧化物酶催化的發光劑為魯米諾及其衍生物；堿性磷酸酶催化的發光底物為AMPPD。

1、魯米諾及其衍生物 魯米諾、異魯米諾及其衍生物都有化學發光特性。魯米諾是最早合成的發光物質。

2、AMPPD 是一種新的化學發光劑，其分子結構中有兩個重要部分，一個是連接苯環和金剛烷的二氧四節環，它可以斷裂并發射光子；另一個是磷酸基團，它維持著整個分子結構的穩定。