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      化學發光免疫分析中常用化學發光劑介紹

      化學發光免疫測定(CLIA),是用化學發光劑直接標記抗原或抗體的一類免疫測定方法。吖啶酯是較為理想的發光底物,在堿性環境中即可被過氧化氫氧化而發光。它是目前發展和推廣應用最快的免疫分析方法,也是目前最先進的標記免疫測定技術,靈敏度和精確度比酶免法、熒光法高幾個數量級,可以完全替代放射免疫分析、徹底淘汰酶聯免疫分析。主要具有靈敏度高、特異性強、試劑價格低廉、試劑穩定且有效期(6-18個月)、方法穩定快速、檢測范圍寬、操作簡單自動化程度高等優點。

       

      用作標記的化學發光劑應符合條件:

       

      1、能參與化學發光反應。

       

      2、與抗原或抗體偶聯后能形成穩定的結合物試劑。

       

      3、偶聯后仍保留高的量子效應和反應動力。

       

      4、應不改變或極少改變被標記物的理化特性,特別是免疫活性。

       

      魯米諾類和吖啶酯類發光劑等均是常用的標記發光劑!

       

      化學發光免疫分析中所使用的標志物分類 

       

      (一)直接化學發光劑 直接用化學發光劑標記抗原或抗體。

       

      吖啶酯是目前常用的直接標記發光劑。

       

      1、吖啶酯 在堿性條件下被H2O2氧化時,發出波長為470nm的光,具有很高的發光效率,其激發態產物N-甲基吖啶酮是該發光反應體系的發光體。吖啶酯類發光劑可直接用于標記半抗原和蛋白質等。用于標記抗體時,結合穩定,結合后并不減少光量子的產生,可獲得高的比活性,有利于雙位點化學發光免疫分析的建立。

       

       2、三聯吡啶釕 三聯吡啶釕是電化學發光劑,它和電子供體三丙胺(TPA)在陽電極表面可同時失去一個電子而發生氧化反應! 

       

      (二)酶促反應發光劑 利用標記酶(辣根過氧化物酶和堿性磷酸酶)的催化作用,使發光劑(底物)發光。

       

      辣根過氧化物酶催化的發光劑為魯米諾及其衍生物;堿性磷酸酶催化的發光底物為AMPPD。

       

      1、魯米諾及其衍生物 魯米諾、異魯米諾及其衍生物都有化學發光特性。魯米諾是最早合成的發光物質。

       

      2、AMPPD 是一種新的化學發光劑,其分子結構中有兩個重要部分,一個是連接苯環和金剛烷的二氧四節環,它可以斷裂并發射光子;另一個是磷酸基團,它維持著整個分子結構的穩定。


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